Informatie

Is het veilig om een ​​eierincubator te gebruiken om bacterieculturen te kweken?

Is het veilig om een ​​eierincubator te gebruiken om bacterieculturen te kweken?


We are searching data for your request:

Forums and discussions:
Manuals and reference books:
Data from registers:
Wait the end of the search in all databases.
Upon completion, a link will appear to access the found materials.

Ik heb een kleine broedstoof gebruikt om omgevingsbacteriën in petrischalen te kweken. Ik draag altijd handschoenen en een bril als ik de platen hanteer en Gramkleuring doe. Hoe waarschijnlijk is het dat bacteriën die op de schaal zijn gekweekt in de lucht kunnen komen als ik de broedmachine of de schaal zelf open?


Een goede gewoonte om minimaliseer de besmetting van een petrischaal en van de externe omgeving is door het deksel nooit helemaal te verwijderen van de petrischaal: om toegang te krijgen tot de inhoud van de petrischaal met een inentingslus, til het deksel aan één kant langzaam op: net hoog genoeg om de inentingslus erin te krijgen, een deel van de inhoud te krijgen en eruit te komen.


als je de petrischaaltjes afgedekt houdt zal er weinig of geen besmetting zijn en zal er een verwaarloosbare e coli aerosol zijn wanneer je de broedmachine opent. zoals vermeld door @MartinKivana, open de platen niet, vooral niet in de buurt van de incubator. In een steriele omgeving is beter…

als je de petrischalen niet bedekt, is je experiment verpest.

je kunt het af en toe afvegen met bleekmiddel ...

dus dat dekt het ongeveer.


Bacteriële transformatie

Transformatie is het proces waarbij vreemd DNA in een cel wordt ingebracht. Transformatie van bacteriën met plasmiden is niet alleen belangrijk voor studies in bacteriën, maar ook omdat bacteriën worden gebruikt als middel voor zowel het opslaan als het repliceren van plasmiden. Hierdoor dragen bijna alle plasmiden (zelfs die ontworpen voor expressie van zoogdiercellen) zowel een bacteriële oorsprong van replicatie als een antibioticumresistentiegen voor gebruik als een selecteerbare marker in bacteriën.

Wetenschappers hebben veel genetische modificaties aangebracht om bacteriestammen te creëren die gemakkelijker kunnen worden getransformeerd en die zullen helpen het plasmide te behouden zonder herschikking van het plasmide-DNA. Daarnaast zijn er specifieke behandelingen ontdekt die de transformatie-efficiëntie verhogen en bacteriën vatbaarder maken voor chemische of elektrische transformatie, waardoor zogenaamde 'competente cellen' ontstaan.

Veel bedrijven verkopen competente cellen, die worden ingevroren en zijn voorbereid op optimale transformatie-efficiëntie bij ontdooien. Voor de hoogste transformatie-efficiëntie raden we u aan de instructies te volgen die bij uw competente cellen zijn geleverd.

Laatste update: 13 november 2017

Bekijk de onderstaande protocolvideo om te leren hoe u afzonderlijke bacteriekolonies kunt isoleren.

  • Schudbroedstoof bij 37 °C
  • Stationaire broedstoof bij 37 °C
  • Waterbad bij 42 °C
  • Ijsemmer gevuld met ijs
  • Microcentrifugebuisjes
  • Steriel verspreidingsapparaat
  • LB-agarplaat (met geschikt antibioticum)
  • LB- of SOC-media
  • Bevoegde cellen
  • DNA dat je wilt transformeren

Celcultuurbesmetting

Biologische besmetting is de schrik van iedereen die met celcultuur werkt. Wanneer culturen geïnfecteerd raken met micro-organismen, of kruisbesmet zijn door vreemde cellen, moeten deze culturen gewoonlijk worden vernietigd. Aangezien de bronnen van kweekbesmetting alomtegenwoordig zijn en moeilijk te identificeren en te elimineren zijn, blijft geen enkel celcultuurlaboratorium onaangetast door deze zorg. Met de aanhoudende toename van het gebruik van celcultuur voor biologisch onderzoek, de productie van vaccins en de productie van therapeutische eiwitten voor gepersonaliseerde geneeskunde en opkomende toepassingen van regeneratieve geneeskunde, blijft cultuurbesmetting een zeer belangrijk probleem.

Invoering

Celcultuur zet een 60-jarige trend voort van toenemend gebruik en belang in academisch onderzoek, therapeutische geneeskunde en medicijnontdekking, vergezeld van een versterkte economische impact. 1,2 Nieuwe therapieën, vaccins en medicijnen, evenals geregenereerde en synthetische organen, zullen in toenemende mate afkomstig zijn van gekweekte zoogdiercellen. Met meer gebruik en vaardigheid van celkweektechnieken komt een beter begrip van de gevaren en problemen die samenhangen met celkweekbesmetting. In de 21e eeuw zijn er betere testmethoden en preventieve instrumenten, en een bewustzijn van het risico en de effecten van besmetting vereist dat celkwekers waakzaam blijven. Onopgemerkte besmetting kan wijdverbreide stroomafwaartse effecten hebben.

Biologische besmetting: een veel voorkomende metgezel

De toevallige ontdekking van penicilline in 1928 was een van die zeldzame gebeurtenissen waar de meeste onderzoekers alleen maar van kunnen dromen. Na terugkomst van een zomervakantie waarin hij achteloos een set petrischalen in een hoek van zijn lab had achtergelaten, ontdekte Alexander Fleming een van de krachtigste drugs van de 20e eeuw. Fleming merkte op dat een van zijn bacterieculturen besmet was met een schimmel, maar de kolonies stafylokokken die de schimmel onmiddellijk omringden, waren vernietigd. De schimmel was natuurlijk Penicillium notatum en Fleming ontdekte vervolgens antibiotica. Dit is echter een zeer zeldzaam voorbeeld van besmetting die het pad van wetenschappelijk onderzoek daadwerkelijk bevordert. Voor het grootste deel blijft de besmetting van culturen de ergste nachtmerrie van elke wetenschapper. Carolyn Kay Lincoln en Michael Gabridge vatten het probleem in 1998 samen: "Contaminatie van celculturen blijft een groot probleem bij zowel de basisonderzoeksbank als bij producenten van bioproducten. Besmetting is wat het gebruik van celculturen als betrouwbare reagentia en hulpmiddelen echt in gevaar brengt.&rdquo 3

De biologische besmetting van celculturen van zoogdieren komt vaker voor dan je zou denken. Statistieken die halverwege de jaren negentig werden gerapporteerd, tonen aan dat tussen de 11 en 15 procent van de culturen in Amerikaanse laboratoria geïnfecteerd waren met Mycoplasma-soorten. 4 Zelfs met een betere herkenning van het probleem en strengere testen van commercieel bereide reagentia en media, was de incidentie van mycoplasmagroei in onderzoekslaboratoriumculturen 23 procent in een recent onderzoek 5 en in 2010 een verbazingwekkende 8,45 procent van de commercieel geteste culturen van biofarmaceutische bronnen waren besmet met schimmels en bacteriën, waaronder mycoplasma. 6

In het onderzoekslaboratorium is besmetting niet alleen een incidentele irritatie, maar het kan ook kostbare middelen kosten, waaronder tijd en geld. Uiteindelijk kan contaminatie de geloofwaardigheid van een onderzoeksgroep aantasten of moeten bepaalde wetenschappelijke publicaties soms worden ingetrokken vanwege angst voor retrospectieve monstercontaminatie of gerapporteerde resultaten die artefacten blijken te zijn. Bij biofarmaceutische productie kan besmetting een nog dramatischer effect hebben wanneer hele productieruns moeten worden weggegooid. Het is daarom uitermate belangrijk om te begrijpen hoe monstercontaminatie kan optreden en welke methoden beschikbaar zijn om dit te beperken en uiteindelijk te voorkomen.

Wat veroorzaakt biologische besmetting?

Biologische verontreinigingen kunnen worden onderverdeeld in twee subgroepen, afhankelijk van het gemak waarmee ze in culturen kunnen worden gedetecteerd, waarbij de meeste bacteriën en schimmels de gemakkelijkste zijn. Degenen die moeilijker te detecteren zijn en dus potentieel ernstigere problemen opleveren, zijn onder meer mycoplasma's, virussen en kruisbesmetting door andere zoogdiercellen.

Bacteriën en schimmels

Bacteriën en schimmels, waaronder schimmels en gisten, zijn alomtegenwoordig in de omgeving en kunnen zich snel koloniseren en bloeien in het rijke celcultuurmilieu. Door hun kleine formaat en snelle groei zijn deze microben de meest voorkomende contaminanten in celculturen. Bij afwezigheid van antibiotica kunnen bacteriën meestal binnen enkele dagen na besmetting in een kweek worden gedetecteerd, hetzij door microscopische observatie, hetzij door hun directe effecten op de cultuur (pH-verschuivingen, troebelheid en celdood). Gisten zorgen er over het algemeen voor dat het groeimedium erg troebel of troebel wordt, terwijl schimmels vertakt mycelium produceren, dat uiteindelijk verschijnt als harige klonten die in het medium drijven.

Mycoplasma's

Mycoplasma's zijn zeker de meest ernstige en wijdverbreide van alle biologische verontreinigingen, vanwege hun lage detectiepercentages en hun effect op zoogdiercellen. Hoewel mycoplasma's technisch gezien bacteriën zijn, hebben ze bepaalde eigenschappen die ze uniek maken. Ze zijn veel kleiner dan de meeste bacteriën (0,15 tot 0,3 &mum), dus ze kunnen tot zeer hoge dichtheden groeien zonder zichtbare tekenen. Ze missen ook een celwand en dat, in combinatie met hun kleine formaat, betekent dat ze soms door de poriën van filtermembranen die bij sterilisatie worden gebruikt, kunnen glippen. Omdat de meest voorkomende antibiotica zich richten op bacteriële celwanden, mycoplasma's zijn resistent.

Mycoplasma's zijn uiterst schadelijk voor elke celcultuur: ze beïnvloeden het metabolisme en de morfologie van de gastheercellen, veroorzaken chromosomale afwijkingen en schade, en kunnen cytopathische reacties veroorzaken, waardoor gegevens van besmette culturen onbetrouwbaar worden. In Europa, mycoplasma De besmettingsniveaus zijn extreem hoog gebleken en liggen tussen de 25 en 40 procent en de gerapporteerde percentages in Japan waren zelfs 80 procent.4 De discrepantie tussen de VS en de rest van de wereld is waarschijnlijk te wijten aan het gebruik van testprogramma's. Statistieken tonen aan dat laboratoria die routinematig testen op mycoplasma besmetting een veel lagere incidentie hebben als ze eenmaal zijn gedetecteerd, kan besmetting worden ingeperkt en geëlimineerd. Testen voor mycoplasma moet minstens één keer per maand worden uitgevoerd en er is een breed scala aan in de handel verkrijgbare kits. De enige manier om detectie van soorten te garanderen, is door ten minste twee verschillende testmethoden te gebruiken, zoals DAPI-kleuring en PCR. 5

Leuk vinden mycoplasma's, virussen geven geen visuele aanwijzingen voor hun aanwezigheid, ze veranderen de pH van het kweekmedium niet en leiden niet tot troebelheid. Omdat virussen hun gastheer gebruiken voor replicatie, kunnen geneesmiddelen die worden gebruikt om virussen te blokkeren ook zeer toxisch zijn voor de cellen die worden gekweekt. Virussen die schade aan de gastheercel veroorzaken, hebben echter de neiging zelfbeperkend te zijn, dus de grootste zorg voor virale besmetting is hun potentieel voor het infecteren van laboratoriumpersoneel. Wie met cellen van mensen of andere primaten werkt, moet extra veiligheidsmaatregelen nemen.

Andere zoogdierceltypes

Kruisbesmetting van een celcultuur met andere celtypen is een ernstig probleem dat pas recent als alarmerend wordt beschouwd. 7,8 Naar schatting 15 tot 20 procent van de cellijnen die momenteel in gebruik zijn, wordt verkeerd geïdentificeerd 9,10 , een probleem dat begon met de eerste menselijke cellijn, HeLa, een ongewoon agressief cervicaal adenocarcinoom geïsoleerd uit Henrietta Lacks in 1952. HeLa-cellen zijn zo agressief dat ze, eenmaal per ongeluk in een kweek geïntroduceerd, de oorspronkelijke cellen snel overwoekeren. Maar het probleem is niet beperkt tot HeLa. Er zijn veel voorbeelden van cellijnen die worden gekarakteriseerd als endotheelcellen of prostaatkankercellen, maar in feite blaaskankercellen zijn en die worden gekenmerkt als borstkankercellen, maar in feite eierstokkankercellen zijn. In deze gevallen treedt het probleem op wanneer het vreemde celtype beter is aangepast aan de kweekomstandigheden en dus de oorspronkelijke cellen in de kweek vervangt. Een dergelijke besmetting vormt duidelijk een probleem voor de kwaliteit van het geproduceerde onderzoek en het gebruik van culturen die de verkeerde celtypes bevatten, kan leiden tot terugtrekking van gepubliceerde resultaten.

Bronnen van biologische verontreinigingen in het laboratorium

Om de frequentie van biologische besmetting te verminderen, is het belangrijk om te begrijpen hoe biologische verontreinigingen cultuurschalen kunnen binnendringen. In de meeste laboratoria zijn de grootste bronnen van microben degene die het laboratoriumpersoneel vergezellen. Deze worden tijdens normaal laboratoriumwerk gecirculeerd als deeltjes in de lucht en aerosolen. Praten, niezen en hoesten kunnen aanzienlijke hoeveelheden aerosolen veroorzaken. Kleding kan ook een reeks micro-organismen van buiten het laboratorium herbergen en vervoeren, dus het is van cruciaal belang om laboratoriumjassen te dragen wanneer u in het celkweeklaboratorium werkt. Zelfs door simpelweg door het laboratorium te bewegen, kan luchtverplaatsing ontstaan, dus de ruimte moet vaak worden schoongemaakt om stofdeeltjes te verminderen.

Bepaalde laboratoriumapparatuur, zoals pipetteerapparaten, vortexers of centrifuges zonder biocontainmentvaten, kunnen grote hoeveelheden microbiële deeltjes en aerosolen genereren. Veelgebruikte laboratoriumapparatuur, waaronder waterbaden, koelkasten, microscopen en koelcellen, zijn ook reservoirs voor microben en schimmels. Onjuist schoongemaakte en onderhouden broedmachines kunnen dienen als een acceptabel huis voor schimmels en bacteriën. Overbevolking van materialen in de autoclaaf tijdens sterilisatie kan ook leiden tot onvolledige eliminatie van microben.

Kweekmedia, rundersera, reagentia en plastic materiaal kunnen ook belangrijke bronnen van biologische verontreinigingen zijn. Hoewel commerciële testmethoden veel verbeterd zijn ten opzichte van eerdere decennia, is het van het grootste belang om materialen te gebruiken die gecertificeerd zijn voor gebruik in celculturen. Kruisbesmetting kan optreden bij het werken met meerdere cellijnen tegelijk. Elk celtype moet zijn eigen oplossingen en benodigdheden hebben en moet afzonderlijk van andere cellen worden gemanipuleerd. Onbedoeld gebruik van niet-steriele benodigdheden, media of oplossingen tijdens routinematige celkweekprocedures is de belangrijkste bron van microbiële verspreiding.

Besmetting is een veelvoorkomend probleem bij het kweken van cellen en het is essentieel dat eventuele risico's effectief worden beheerd, zodat de integriteit van het experiment behouden blijft. Antibiotica kunnen enkele weken worden gebruikt om een ​​bekende microbiële besmetting te verhelpen, maar routinematig gebruik moet worden vermeden. Regelmatige opname van antibiotica selecteert niet alleen resistente organismen, maar maskeert ook eventuele infecties op laag niveau en gebruikelijke fouten in de aseptische techniek.

De beste aanpak om besmetting te bestrijden is dat elke persoon een register bijhoudt van al het celkweekwerk, inclusief elke passage, het algemene celuiterlijk en manipulaties, waaronder het voeden, splitsen en tellen van cellen. Als er toch besmetting optreedt, noteer dan de kenmerken en de tijd en datum. Op deze manier kan elke besmetting worden gelokaliseerd op het moment dat deze optreedt en kunnen aseptische technieken of laboratoriumprotocollen worden verbeterd. In het volgende artikel van deze serie gaan we dieper in op effectieve maatregelen voor besmettingspreventie, in het bijzonder de sleutelrol van de CO2 broedmachine.


Selectieve groei

Een andere reden om bij verschillende temperaturen te incuberen is het bevorderen van de groei van een doelgroep bacteriën. Hoewel zowel ziekteverwekkers als omgevingsbacteriën die binnenshuis worden gevonden mesofiel zijn, zullen ziekteverwekkers sneller groeien dan omgevingsstammen bij 37 graden Celsius (98 graden Fahrenheit), de temperatuur van het menselijk lichaam. Het tegenovergestelde is waar bij 25 C (77 F), de temperatuur van de meeste gebouwen. Omdat laboratoria voor studentenonderwijs vaak de groei van pathogenen willen voorkomen, worden culturen vaak bij 25 C (77 F) geïncubeerd.


Microbiologische broedmachines

Succesvolle incubatie is een essentiële stap in uw dagelijkse workflows. Thermo Scientific microbiologische en gekoelde incubators zijn ontworpen met uw monsters in gedachten om resultaten te produceren waarop u kunt rekenen.

Blader door ons complete portfolio of laat een van onze experts u helpen bij het maken van een keuze.

Heratherm microbiologische broedmachines

Heratherm koelbroedstoven

Precisie lage temperatuur gekoelde incubator*

Incubators voor microbiologische studies zijn beschikbaar met verschillende technologieën om de specifieke incubatietemperaturen aan te pakken die nodig zijn voor de toepassing.

Microbiologische broedmachines, ook wel "alleen warmte" of "standaard" incubators genoemd, hebben verwarmingselementen en kunnen incubatietemperaturen bieden die alleen boven de omgevingstemperatuur liggen. Als het laboratorium een ​​omgevingstemperatuur van ongeveer 22°C heeft, kunnen ze alleen incubatietemperaturen aan van meer dan ongeveer 27°C of zelfs 30°C.

Gekoelde incubators, ook wel "koelende" incubators genoemd, hebben koeling en verwarming en kunnen een breder temperatuurbereik bieden - ook temperaturen die dicht bij de omgevingstemperatuur of zelfs onder de omgevingstemperatuur liggen. Ze dekken meestal ook het incubatietemperatuurbereik boven de omgevingstemperatuur - zoals de "microbiologische" of "alleen warmte" incubators doen. Door de complexere technologie die wordt gebruikt, is een koelbroedstoof een hogere investering.


Wat zijn de richtlijnen voor het kweken van artemia?

De voordelen van het voeren van levende artemia zijn algemeen bekend en geaccepteerd in de aquariumgemeenschap. Als alternatief zijn er veel handige en goed geformuleerde kunstmatige, inerte diëten die beweren de behoefte aan dergelijk levend voedsel volledig te elimineren. Deze bereide diëten en, belangrijker nog, de specifieke aminozuren, lipiden en vitamines die ze bevatten, zijn, zo niet volledige vervangingen voor levend voer, vaak noodzakelijke toevoegingen aan een dieet van één soort dat een of meer van de essentiële voedingsstoffen mist.

Dat gezegd hebbende, doet een drassig, levenloos deeltje van gegelatineerd zetmeel en gedroogd vismeel zelden de voedingsreactie van vissen ontbranden, zoals de schokkerige zwemcapriolen van een levende artemia. Om deze reden zullen levende artemia altijd een integraal onderdeel zijn van de oplossing voor het in stand houden van gezonde aquariumpopulaties.

Naast het bewegen over de waterkolom hebben levende artemia een aantal andere nuttige eigenschappen, namelijk:

  • Ze zijn zacht en licht verteerbaar en bevatten enzymen die vissen helpen om ander voer beter te benutten
  • Ze bevatten veel eiwitten, variërend van 55% tot 60% eiwit per droog gewicht, wat een snelle gewichtstoename bij jonge vissen ondersteunt
  • Ze kunnen worden verrijkt met andere voeders of additieven, een proces dat vaak wordt aangeduid als "bio-inkapseling" om HUFA's, antibiotica of andere voedingsstoffen aan de doelsoorten te leveren (zie SELCO)
  • Ze kunnen worden gevoerd aan zowel zee- als zoetwatervissen, overleven en zwemmen urenlang en zelfs in zoet water
  • Ze zijn afkomstig uit hyperzoute biotopen en zijn daarom zelden vectoren voor ziekten die vissen treffen
  • Ze groeien snel, vermenigvuldigen zich in gewicht 500-voudig in drie tot vier weken en nemen in grootte toe van 450 micron tot 1,5 centimeter in lengte.

Toch is het kweken van pekelgarnalen in bruikbare aantallen geen gemakkelijke taak en je kunt verwachten dat je er net zoveel, zo niet meer tijd aan zult besteden als aan het kweken en verzorgen van babyvissen & mdash, vaak met minder dan gehoopte resultaten . De volgende primer is ontworpen om te helpen voorkomen dat de meest voorkomende fouten worden gemaakt & mdash het vaakst, de fouten van overbezetting, overvoeding, ondervoeding, onvoldoende beluchting, onderfiltratie en het verstrekken van ongepaste voeders.

Gezien de talloze manieren om deze beestjes per ongeluk te doden, zelfs in een comfortabele, gecontroleerde omgeving, lijkt het contra-intuïtief, zo niet ronduit ontmoedigend voor de aquariaan, dat een dier van prehistorische afkomst, in zijn natuurlijke omgeving, hoog en droog kan worden achtergelaten in de zomer, maandenlang uitgedroogd onder de hete zon, met geweld afgevoerd naar een verre oord in de darmen van een vogeltrekvogel, opnieuw afgezet in een hyperzout meer zonder leven, en onderworpen aan temperaturen onder het vriespunt, alleen om uit zijn capsule om weer te gedijen en zelfs te verspreiden.

Laten we, zonder verder te herkauwen, aannemen dat we de eieren met succes hebben uitgebroed en de artemia willen kweken. Kunnen we ze niet, zoals onze goedbedoelende webmaster vroeg, naar een Franse eindschool sturen?

Cultuurtank

De kweektank kan zo simpel zijn als een emmer van 5 gallon of zo betrokken zijn als een Kreisel-tank van $ 500. De belangrijke ontwerpoverwegingen bij het kiezen of bouwen van een kweektank zijn het mogelijk maken van temperatuurregeling, adequate beluchting (om het opgeloste zuurstofgehalte te handhaven en voedseldeeltjes te laten zweven), interne of externe waterfiltratie en/of gedeeltelijke watervervanging en de concentratie en afvoer van afval, sterfte en ontlasting (via afgeschermde afvoerleidingen of hevelen). Cultuursystemen zijn gevarieerd, van batch- of statische systemen tot geavanceerde doorstroomtanks voor kweken met een hoge dichtheid. Als het alleen de bedoeling is om een ​​klein aantal artemia te observeren, is een aquarium met een zand-/modderfilter en een of twee richtbare standpijpen van de luchtbrug ideaal.

Kous

Om uw kansen op succes te vergroten, begint u met een bezettingsdichtheid van 1.000 dieren per liter of minder.

Hoe tel je 1.000 minuscule baby-pekelgarnalen? De eenvoudigste manier om artemia-tellingen te beheren, is door monsters te nemen uit een willekeurig verdeelde populatie door kleine hoeveelheden van het geheel te extraheren, te tellen en vervolgens te extrapoleren. Laten we aannemen dat we zijn begonnen met één gram (ongeveer 1/2 theelepel) van een ei van 80% uitbroedkwaliteit. Als we na 24 uur incubatie het grootste deel van de pas uitgekomen baby-pekelgarnalen terugkrijgen, zouden we meer dan 200.000 baby-pekelgarnalen hebben!

Om onze theorie van aliquotbemonstering te testen, brengt u alle dieren over in een fles van één liter met schoon zeewater met beluchting. De beluchting houdt de artemia in suspensie, en dus willekeurig verdeeld over de kegel of fles. Gebruik een pipet van één milliliter om één milliliter water te extraheren, en daarmee ongeveer 1/1000ste van de totale bevolking (1 liter = 1.000 milliliter). Als onze bemonsteringstechniek adequaat is (replicaten zijn aan te raden), zouden we ongeveer 200 dieren in ons aliquotmonster moeten hebben. Als er geen pipet beschikbaar is, kan een gekalibreerde pipet worden gebruikt om een ​​gemeten monster uit de fles te trekken.

Opmerking: als dit proces uw tolerantie voor verveling al heeft overschreden, kunt u overwegen hier te stoppen, alle nieuw geoogste artemia in de fles van één liter te verrijken met SELCO en de verrijkte baby-pekelgarnalen aan uw vissen of zeepaardjes te voeren . Maar als je aandringt op grotere en vleziger artemia, lees dan verder. Onthoud gewoon & mdash dat je je kans hebt gehad!

Het geprefereerde zoutgehalte voor het kweken van artemia is 35-40 ppt (soortelijk gewicht 1,024-1,028). Anders dan bij de bereiding van uitkomstoplossingen, waar huishoudzout, koosjer zout en zonnezout voldoende zijn, moet het kweekwater vooraf worden gemengd met zeezout van aquariumkwaliteit. Vergeet niet om vooraf te mengen en extra water op te slaan voor later gebruik. Je hebt het nodig!

De aanvankelijke pH moet tussen 7,5 en 8 liggen. De pH zal tijdens de kweekperiode waarschijnlijk dalen en kan naar boven worden bijgesteld door toevoeging van zuiveringszout of NaHCO3. Controleer de pH regelmatig en pas indien nodig aan.

Artemia zijn over het algemeen tolerant ten opzichte van lage niveaus van opgeloste zuurstof. Zuurstofstress wordt vaak aangegeven door een roodheid van de dieren veroorzaakt door de verhoogde aanwezigheid van háeligmoglobine. Zorgen voor voldoende beluchting om voedsel in suspensie te houden, elimineert meestal alle zorgen over DO (opgeloste zuurstof). Houd er rekening mee dat kleine belletjes efficiëntere voertuigen zijn voor zuurstofoverdracht, maar dat zeer fijne belletjes de zwemaanhangsels vervuilen en de voeding verstoren. Als het DO-niveau onder 2,5 mg/l-1 daalt, voeg dan extra luchtstenen toe

De temperatuur moet tussen 20° Celsius en 25° Celsius (68°F-79°F) worden gehouden. Onthoud dat het vervangende water van dezelfde temperatuur moet zijn om thermische schokken te voorkomen.

Voeden

Artemia zijn continue, niet-selectieve filtervoeders.2 De moeilijkste uitdaging bij het kweken van artemia is het verstrekken van voer van de juiste grootte in voldoende concentraties zonder de waterkwaliteit onnodig in gevaar te brengen. Gelukkig zijn er een aantal makkelijk te verkrijgen voeders die zowel qua grootte (minder dan 20 micron) als qua voedingswaarde optimaal zijn.

Tankontwerp en beluchting spelen een belangrijke rol bij de distributie van voer door de waterkolom. Voer moet in suspensie worden gehouden om te worden gebruikt. Dit wordt bereikt door het gebruik van gerichte luchtbruggen, luchtstenen en retourwaterstromen. Bij gebruik van droogvoer wordt een betere voersuspensie bereikt door het voer voor te mengen met schoon zeewater.

Stikstofniveaus moeten worden gecontroleerd. NO2-N-niveaus moeten onder 320 mg/l-1,3 worden gehouden. De waterkwaliteit wordt gecontroleerd door een combinatie van mechanische filtratie, extern of intern, en of verdunning met nieuw, schoon water.

Om een ​​adequate waterkwaliteit te behouden, moeten de gesuspendeerde vaste stoffen, niet opgegeten voedsel, ontlasting en afval regelmatig worden verwijderd. Dit stelt het raadsel voor: hoe verwijder je deze verontreinigende stoffen efficiënt zonder ook het voedsel te verwijderen? Helaas is er geen eenvoudig antwoord. De benaderingen die in de literatuur worden beschreven, zijn meer kunst dan wetenschap, of worden helemaal verdoezeld. Bepaalde verliezen in voedseldichtheid als gevolg van filtratie zijn onvermijdelijk. Compromis bestaat vaak uit het uitfilteren van alleen grote koppels (waardoor voedsel en zwevende stoffen kunnen passeren), waardoor koppels kunnen bezinken of zich concentreren in de buurt van afvalwaterafvoeren voordat ze worden verwijderd, langere waterretentietijden gebruiken en/of afwisselend intermitterende filter- en voercycli.

Naarmate dieren groeien, kunnen filters met grotere maaswijdtes worden gebruikt. Een typisch filter heeft in het begin openingen van 100 micron. Deze openingen kunnen worden vergroot tot 350 micron als de dieren ongeveer twee weken oud zijn. Filters moeten regelmatig worden schoongemaakt. Door luchtstenen voor effluentfilters te plaatsen, wordt verblinding van het filter voorkomen. Het is duidelijk dat toenemende wateruitwisselingssnelheden en toenemende filteropeningsmaten een evenredige toename van de voedingssnelheden noodzakelijk maken om de gewenste voedselceldichtheden te behouden.

Kweekdichtheid, voedselceldichtheid en diergezondheid kunnen worden gecontroleerd door routinematig een beker water te verwijderen en te onderzoeken en deze tegen een licht te houden voor nauwkeurige inspectie. Het is mogelijk om de volheid van de darm op te merken en te bepalen of de dieren voldoende worden gevoerd. De dichtheid van voedselcellen kan ook worden gemeten door een Secchi-schijf in het tankwater te plaatsen om de helderheid te meten. De diepte waarop de Secchi-schijf in het water wordt neergelaten voordat deze wordt verduisterd, wordt waargenomen en geregistreerd. Voedingstarieven en wisselkoersen worden gehandhaafd op een niveau dat geschikt is voor uw specifieke systeem.

Het geprefereerde voer voor artemia is gekweekte, levende diatomeeën. Een aantal soorten is met succes gebruikt, waaronder: Nannochloropsis sp., Tetraselmis sp., en Dunaliella sp. Het verstrekken van levende diatomeeën brengt natuurlijk een dubbele inspanning met zich mee die evenredig is met het aantal te voeren artemia. Zoals eerder vermeld, zijn artemia continue feeders en, bij hoge dichtheden, snel helder water van diatomeeën. Vertrouwen op levende diatomeeënculturen, hoewel praktisch mogelijk, moet worden gedaan met vervangend bevroren of droog voer dat binnen handbereik is als uw algenculturen crashen.

Een van de beste keuzes in gemakkelijk verkrijgbare voeders die we hebben gevonden voor het kweken van artemia zijn de cryo-geconserveerde algenpasta's, met name Nannochloropsis sp. of de gepatenteerde mix, Tahitian Blend, die verschillende algensoorten en gestabiliseerde vitamine C bevat. Deze pasta's zijn niet-levensvatbare, sterk geconcentreerde algencellen die druppelsgewijs aan de kweektank kunnen worden toegediend. Het gebruik van cryo-pasta's met een bekende celdichtheid kan de kweker in staat stellen om de voedingsniveaus snel af te stemmen op de dichtheid en groei van de artemia-populatie.

Andere voeders die met succes zijn gebruikt voor het kweken van artemia zijn de gesproeidroogde eencellige gisten, met name Torula. Andere voeders die zijn gebruikt om artemia te kweken zijn gemicroniseerde vormen van rijstzemelen, maïszemelen en sojabonen.4 Deze voeders worden vaak gebruikt in combinatie met andere benaderingen. De juiste grootte van deeltjes kan worden bereikt door zemelen te microniseren (met behulp van een elektrische blender) met zeewater en door een zak van 250 mesh of fijner te filteren. Gesproeidroogd Arthrospira platensis (voorheen Spirulina platensis) is ook gebruikt om pekelgarnalen in stand te houden. Voer dat gemakkelijk voedingsstoffen in het water uitspoelt, moet worden vermeden, omdat ze zullen bijdragen aan een hoge bacteriële belasting, een verhoogd zuurstofverbruik en vervuiling van zwemaanhangsels.

Algemeen

Zoals eerder vermeld, zijn er veel en gevarieerde systemen bedacht voor de doorgroei van artemia. Voor kweken met een hoge dichtheid (10.000+ dieren per liter) vereist overleving robuuste mechanische filtratie en wateruitwisseling in feite, een toevoerkanaalsysteem met aanvullende behandelings- en filtratieapparatuur. Lagere dichtheid (1.000 dieren/lt.) "batch"-systemen zijn gebaseerd op een combinatie van regelmatige wateruitwisseling of verdunning met schoon zeewater en regelmatige verwijdering van afval. In het batchsysteem worden de voedingssnelheden verlaagd om te compenseren voor langere waterretentietijden, wat vaak resulteert in een langzamere groei. In beide systemen wordt de waterkwaliteit verbeterd door toevoeging van een eiwitafschuimer.

Ziekte

Het is niet ongewoon voor filamenteuze Leucotrix bacteriën opduiken in de eiwitrijke kweekomgeving. Vibrio sp. bacteriën en andere infectieziekten kunnen voorkomen. Deze uitbraken kunnen worden behandeld met antibiotica en/of worden bestreden door het zoutgehalte te verhogen. Het is belangrijk om gedesinfecteerde cysten te gebruiken en om kweekapparatuur routinematig te desinfecteren met een hypochlorietoplossing.

Zoals eerder gesuggereerd, vereist het produceren van levende volwassen artemia in voldoende aantallen om talloze aquaria of zeepaardjeshokken te voeden veel werk. De eisen van het voeren van artemia en het reinigen van filters zijn niet aflatende 24/7. Aan de andere kant is een artemia-cultuur met een lage dichtheid lonend en minder moeilijk. Ons beste advies is om klein te beginnen en geleidelijk op te schalen.

Referenties

1Handleiding over de productie en het gebruik van levend voedsel voor aquacultuur. FAO Fisheries Technical Paper 361, Lavens, P en Sorgeloos, P. 1996, p. 168.


Risicobeoordeling

Microbiologie op school zal over het algemeen veilig zijn, maar voordat er enige praktische activiteit wordt ondernomen, moeten de risico's worden beoordeeld.

Elke persoon (studenten, technici of docenten) die aan een praktische activiteit begint, is verantwoordelijk voor zijn of haar gezondheid en veiligheid en die van anderen die door het werk worden beïnvloed.

Risicobeoordeling omvat het vergelijken van de stappen die betrokken zijn bij een beoogde activiteit met procedures die worden voorgesteld in modelrisicobeoordelingen. Dit identificeert de veiligheidsmaatregelen die moeten worden genomen in de context van het werkniveau en, mogelijk, de noodzaak om de procedure aan te passen zodat de risico's voor de gezondheid en veiligheid van eventuele gevaren worden geminimaliseerd.

Ook moeten lokale regels worden nageleefd. Van het grootste belang bij risicobeoordeling is een overweging van de vaardigheden en het gedrag van de leerlingen die op het punt staan ​​een praktische activiteit aan te pakken. Een procedure die veilig is voor één groep individuen, moet mogelijk worden aangepast met een andere klas.

Ook belangrijk is ervoor te zorgen dat een procedure veilig is voor leerlingen, maar ook niet de gezondheid en veiligheid van technici of leraren in gevaar brengt tijdens de voorbereiding of verwijdering. Bij het nemen van de juiste voorzorgsmaatregelen is het verstandig dat alle culturen als potentieel pathogeen worden behandeld (bijvoorbeeld vanwege mogelijke besmetting).

Noodprocedures, zoals het omgaan met lekkages, moeten ook worden overwogen.


Op cellen gebaseerde griepvaccins

Voor de productie van griepvaccins op basis van cellen zijn geen kippeneieren nodig, omdat de vaccinvirussen die worden gebruikt om het vaccin te maken, in dierlijke cellen worden gekweekt.

Wat zijn celgebaseerde griepvaccins?

&lsquoCell-based&rsquo verwijst naar hoe het griepvaccin (griepvaccin) wordt gemaakt. De meeste geïnactiveerde griepvaccins worden geproduceerd door griepvirussen in eieren te kweken. De griepvirussen die in de celgebaseerde vaccins worden gebruikt, worden gekweekt in gekweekte cellen van zoogdieroorsprong in plaats van in kippeneieren.

Flucelvax Quadrivalent is het enige op cellen gebaseerde geïnactiveerde griepvaccin dat door de FDA is goedgekeurd voor gebruik in de Verenigde Staten.

Wie kan Flucelvax Quadrivalent krijgen?

Flucelvax Quadrivalent is goedgekeurd voor gebruik bij personen van 4 jaar en ouder.

Waarom is er een celgebaseerd griepvaccin ontwikkeld?

Cell-based flu vaccine production does not use flu viruses grown in eggs and, therefore, is not dependent on the supply of eggs. In addition, cell-based flu vaccines that use cell-based candidate vaccine viruses (CVVs) have the potential to offer better protection than traditional, egg-based flu vaccines. The viruses used to make cell-based vaccines may be more similar to circulating &ldquowild&rdquo flu viruses than the viruses used to make egg-based vaccines. In one study published in the Journal of Infectious Diseases external icon among Medicare beneficiaries 65 years and older, cell-based vaccine provided greater protection against flu-related hospitalizations than standard-dose, egg based vaccine.

For the 2020-2021 flu season, all four flu viruses used in the Flucelvax Quadrivalent are cell-derived, making the vaccine egg-free.

How is the cell-based vaccine manufacturing process different than the traditional egg-based manufacturing process?

The cell-based vaccine manufacturing process uses animal cells (Madin-Darby Canine Kidney, or MDCK cells) as a host for the growing flu viruses instead of fertilized chicken eggs. For the 2020-2021 season, the viruses provided to the manufacturer to be grown in cell culture are cell-derived rather than egg-derived. Learn more about the cell-based flu vaccine manufacturing process on CDC&rsquos How Flu Vaccines are Made web page.

What is the significance of FDA approving cell-based candidate vaccine viruses for use in the Flucelvax Quadrivalent cell-based flu vaccines?

Growing flu viruses in eggs can introduce changes (called egg-adapted changes) that can cause differences between the viruses in the vaccine and the ones that are circulating. These changes may have important implications for the body&rsquos immune response to vaccination. For example, egg-adapted changes could cause the body&rsquos immune system to produce antibodies that are less effective at preventing disease caused by the specific flu viruses in circulation. FDA&rsquos approval of cell-based CVVs for use in cell-based flu vaccines could possibly improve the effectiveness of cell-based flu vaccines.

What are the possible benefits of using cell-based flu vaccines?

Observational studies have shown greater protection against flu or flu-like illness among people who received Flucelvax compared to those who received standard-dose egg-based vaccines.

A potential advantage of cell culture technology is that it might permit faster start-up of the vaccine manufacturing process in the event of a pandemic. The cells used to manufacture Flucelvax Quadrivalent are kept frozen and &ldquobanked.&rdquo Cell banking ensures an adequate supply of cells is readily available for vaccine production. Growing the flu viruses in cell culture for the manufacture of Flucelvax Quadrivalent is not dependent on an egg supply. Cell-based flu vaccines that are produced using CVVs have the potential to be more effective than traditional egg-based flu vaccines.

What were the results of the clinical trials using cell-based technology?

A clinical trial of the previous trivalent formulation of Flucelvax demonstrated effectiveness and safety among persons 18 through 49 years old. In immunogenicity studies among people 18 years and older and 4 through 17 years old, Flucelvax Quadrivalent was found to produce a similar immune response to the trivalent formulation. Post-vaccination symptoms were typical of those seen with other injectable flu vaccines.

Has cell-based technology been used before?

Cell culture technology has been used to produce other U.S.-licensed vaccines, including vaccines for rotavirus, polio, smallpox, hepatitis, rubella and chickenpox.

Cell-based flu vaccines have been approved for use in many European countries.


Why use Drosophila?

Teachers should use fruit flies for high school genetic studies for several reasons:
1. They are small and easily handled.
2. They can be easily anesthetized and manipulated individually with unsophisticated equipment.
3. They are sexually dimorphic (males and females are different), making it is quite easy to differentiate the sexes.
4. Virgins fruit flies are physically distinctive from mature adults, making it easy to obtain virgin males and females for genetic crosses.
5. Flies have a short generation time (10-12 days) and do well at room temperature.
6. The care and culture of fruit flies requires little equipment, is low in cost and uses little space even for large cultures.

By using Drosophila, students will:
1. Understand Mendelian genetics and inheritance of traits
2. Draw conclusions of heredity patterns from data obtained
3. Construct traps to catch wild populations of D. melanogaster
4. Gain an understanding of the life cycle of D. melanogaster, an insect which exhibits complete metamorphosis
5. Construct crosses of caught and known wild- type and mutated flies
6. Learn techniques to manipulate flies, sex them, and keep concise journal notes
7. Learn culturing techniques to keep the flies healthy
8. Realize many science experiments cannot be conducted and concluded within one or two lab sessions

National standards covered in these lessons:
Inhoud:
1. Organisms require a set of instructions for specifying traits (heredity)
2. Hereditary information is located in genes.
3. Combinations of traits can describe the characteristics of an organism.

Students goals:
1. Identify questions and concepts that guide scientific investigations
2. Design and conduct scientific investigations
3. Formulate and revise scientific explanations and models using logic and evidence
4. Communicate and defend a scientific argument

The genetics of Drosophila are well documented and several public-domain web sites feature the complete annotated genome. Therefore, those teachers or students wishing to see where their mutations occur have a ready reference available.

Since Drosophila has been so widely used in genetics, there are many different types of mutations available for purchase. In addition, the attentive student may find mutations within their own wild-caught cultures since, due to a short generation time, mutations are relatively common compared to other animal species.


Classificatie
Domain: Eukarya
Koninkrijk: Animalia
Phylum: Arthropoda
Class: Insecta
Order: Diptera
Family: Drosophilidae
Genus: Drosophila (“dew lover”)
Species: melanogaster (“dark gut”)


Levenscyclus van Drosophila melanogaster
Drosophila melanogaster exhibits complete metamorphism, meaning the life cycle includes an egg, larval (worm-like) form, pupa and finally emergence (eclosure) as a flying adult. This is the same as the well-known metamorphosis of butterflies. The larval stage has three instars, or molts.


Day 0: Female lays eggs
Day 1: Eggs hatch
Day 2: First instar (one day in length)
Day 3: Second instar (one day in length)
Day 5: Third and final instar (two days in length)
Day 7: Larvae begin roaming stage. Pupariation (pupal formation) occurs 120 hours after egg laying
Day 11-12: Eclosion (adults emerge from the pupa case).

• The generation time of Drosophila melanogaster varies with temperature. The above cycle is for a temperature of about 22°C (72°F). Flies raised at lower temperature (to 18°C, or 64°F) will take about twice as long to develop.
• Females can lay up to 100 eggs/day.
• Virgin females are able to lay eggs however they will be sterile and few in number.

After the eggs hatch, small larvae should be visible in the growing medium. If your media is white, look for the small black area (the mouth hooks) at the head of the larvae. Some dried premixed media is blue to help identify larvae however this is not a necessity and with a little patience and practice, larvae are easily seen. In addition, as the larvae feed they disrupt the smooth surface of the media and so by looking only at the surface one can tell if larvae are present. However, it is always a good idea to double check using a stereo microscope. After the third instar, larvae will begin to migrate up the culture vial in order to pupate.


Praktisch werk om te leren

Incubating the plates to promote growth of microben is an essential part of any microbiologie onderzoek. Incubating in aerobics conditions, and below human body temperature, reduce the risk of encouraging micro-organismen (bijzonder bacteriën) that could be pathogenic aan mensen. Taping the lids on reduces the chance that students will open plates when viewing, but there are details below of how to kill plates completely if this is still a significant risk.

Gezondheid & veiligheid en technische opmerkingen

Carry out a full risk assessment before starting any microbiology work (see note 1 for more details).

1 Before embarking on any practical microbiological investigation carry out a full risk assessment. For detailed safety information on the use of microorganisms in schools and colleges, refer to Basic Practical Microbiology – A Manual (BPM) which is available, free, from the Society for General Microbiology (email This email address is being protected from spambots. You need JavaScript enabled to view it. ) or go to the safety area of the SGM website (www.microbiologyonline.org.uk/safety.html) or refer to the CLEAPSS Laboratory Handbook, section 15.2.

2 Keep plates at room temperature or incubate at 20-25 °C for 2-3 days. Fungi grow more successfully at lower temperatures. Do not incubate at human body temperature (or above 30 °C) – this reduces the risk of culturing microbes that are pathogens to humans.

3 Reducing the temperature to 4 °C will slow the growth of any cultures – so you can show your students a 2-3 day growth if your lessons are a week apart.

4 All inoculated plates must be taped before incubation to ensure they cannot be opened accidentally. Do this by fixing with 2 or 4 short strips of adhesive tape at opposite edges of the dish. Do not seal completely as this may promote the growth of anaerobic pathogens or prevent normal growth by restricting diffusion of oxygen. See CLEAPSS Laboratory Handbook 15.2.10.

5 Plates are incubated upside down (agar up), so that condensation does not drip onto the plate and interfere with the developing microbes.

6 You might replace lids if condensation makes viewing difficult, so label plates on the bottom – with Chinagraph or wax pencils, permanent marker pens or a small adhesive label at one edge.

7 Count the plates out and in again to ensure that you have collected all the plates at the end of a lesson.

8 You can seal plates around the whole circumference just before viewing if you think there is any risk that your students will open the plates. Or you can stop the growth of a culture completely by placing a piece of filter paper into the lid of the inverted plate. Add a little 40% methanal solution carefully to soak the filter paper and replace the base. Leave for 24 hours. Remove the filter paper, remove any surplus liquid, and reseal the plate. See CLEAPSS Laboratory Handbook section 15.2.11. On Hazcard 063, methanal is described as toxic at this concentration and a category 3 carcinogen.

Web links

www.microbiologyonline.org.uk/sgmprac.htm
Society for General Microbiology – source of Basic Practical Microbiology, an excellent manual of laboratory techniques and Practical Microbiology for Secondary Schools, a selection of tried and tested practicals using microorganisms.

www.microbiologyonline.org.uk
MiSAC (Microbiology in Schools Advisory Committee) wordt ondersteund door de Society for General Microbiology (zie hierboven) en hun websites bevatten meer veiligheidsinformatie en een link om per e-mail om advies te vragen.

(Websites bezocht oktober 2011)

© 2019, Royal Society of Biology, 1 Naoroji Street, Londen WC1X 0GB geregistreerd liefdadigheidsinstelling nr. 277981, opgericht door Royal Charter


Bekijk de video: zwemmend ei (Februari 2023).